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RT-PCR技術(shù)可以從每毫升血液中檢測到單個(gè)腫瘤細(xì)胞。Wang等在乳腺癌中利用以KRT19和ERBB2作為目的基因進(jìn)行雙相RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，雙相RT—PCR檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞的敏感性比免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測要高，而且特別在早期乳腺癌尤為明顯[12]。但是，由于mRNA的不穩(wěn)定性、取樣時(shí)上皮細(xì)胞的污染、腫瘤標(biāo)志物在外周血的非正常表達(dá)以及假基因干擾等因素的影響，可致假陽性。同時(shí)該方法無法進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察以及腫瘤細(xì)胞的定量限制了該技術(shù)的應(yīng)用。

2.3 流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，FCM）

是一項(xiàng)集激光、電子物理學(xué)、計(jì)算機(jī)、流體動力學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)等方法為一體的細(xì)胞分析技術(shù)。它利用腫瘤細(xì)胞單抗結(jié)合熒光物質(zhì)使腫瘤細(xì)胞染色，然后用流式細(xì)胞儀分析，染色細(xì)胞被視為陽性，大致敏感性為1/105。此技術(shù)可以對外周血樣本的CTCs進(jìn)行精確定量技術(shù)，并可以檢測細(xì)胞DNA含量。近來高通量FCM（如Fishman-R microfluidic FCM）以及新腫瘤標(biāo)志物（如EGFR、磷酸化EGFR）的應(yīng)用大大提高了流式細(xì)胞術(shù)的診斷效率[13]。

2.4 CTCs芯片技術(shù)（CTCs-Chip）

CTCs芯片系統(tǒng)富集得到的CTCs采用相同的分析方法，由于CTCs并不表達(dá)白細(xì)胞的共同抗原CD45，該檢測系統(tǒng)采用不同熒光標(biāo)記的抗EpCAM抗體、抗EGFR抗體、抗細(xì)胞角蛋白CK-8、CK-18和CK-19抗體以及核熒光染料DAPI作為陽性指標(biāo)，CD45作為陰性指標(biāo)?？稍?/span>10億以上血細(xì)胞檢測出單個(gè)癌細(xì)胞，敏感性非常高，并適用于所有類型腫瘤患者的外周血樣本。該方法大大提高了敏感性和從全血中捕獲稀少細(xì)胞的得率, 同時(shí)操作過程簡單溫和，從而使分離到的CTCs保持活力。目前第二代CTCs-Chip技術(shù)（Hchipherrin one—chip），不僅改進(jìn)了該芯片構(gòu)造，使血液標(biāo)本流經(jīng)芯片時(shí)形成微漩渦，增加了芯片表面包被抗體捕獲CTCs的機(jī)會，更加有效捕獲數(shù)量極少的CTCs，可捕獲血液中90%以上的癌細(xì)胞，而且該芯片還安裝了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)載玻片，可使用傳統(tǒng)病理檢查方法鑒別癌細(xì)胞[14]。

3 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測的臨床應(yīng)用

循環(huán)腫瘤細(xì)胞在原發(fā)腫瘤早期就可以發(fā)生并可以在外周血中檢測到，已經(jīng)開始用于腫瘤的輔助診斷。近年來，CTC檢測在臨床上的應(yīng)用使之成為了國際腫瘤分期系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)之一。2007年美國臨床腫瘤協(xié)會（ASCO）首次將CTC納入腫瘤檢測標(biāo)志物[15]。CTCs作為一種全新的腫瘤生物標(biāo)志物，在疾病早期階段有助于良、惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤早期診斷、輔助診斷與腫瘤分期、判斷患者預(yù)后，治療過程中可用以進(jìn)行療效監(jiān)測以及指導(dǎo)個(gè)體化治療。但必須認(rèn)識到：自2004年美國強(qiáng)生公司Veridex開發(fā)的Cellsearch CTC檢測技術(shù)獲得美國FDA認(rèn)證（準(zhǔn)入應(yīng)用于預(yù)測有轉(zhuǎn)移性的乳腺癌、結(jié)直腸癌或前列腺癌的無進(jìn)展存活率和總存活率）以來，其它眾多廠家推出的循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測儀器都未獲得相關(guān)認(rèn)證或準(zhǔn)入，對惡性腫瘤的應(yīng)用領(lǐng)域也未在更廣的腫瘤類型中獲得準(zhǔn)入。目前，更多的報(bào)道尚處于臨床研究階段。但是，CellSearch CTC檢測系統(tǒng)2015年底已告停產(chǎn)的傳聞也從側(cè)面反映了為“腫瘤患者的科學(xué)算命”中“算命”的份量更重一些。

乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率逐年上升，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是主要的致死因素。CTCs的檢測對乳腺癌預(yù)后判斷、監(jiān)測病情和早期發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移等具有重要臨床意義。Biggers等檢測了41例早期乳腺癌患者，其中10例（24.4%）在術(shù)前已可檢測到CTCs。研究表明，轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者在治療前、治療中和治療后的CTCs水平均與其預(yù)后密切相關(guān)，CTCs可作為轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者獨(dú)立的預(yù)后因子。有研究報(bào)道采用黏蛋白1（mucin 1，MUC1）和CK19共同作為檢測乳腺癌CTCs的標(biāo)志物，用EPISPOT檢測轉(zhuǎn)移性乳腺癌（metastatic breast cancer，MBC）患者中CTCs分泌的MUC1，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有被檢者的結(jié)果均為陽性，而健康人群中卻無法檢測得到。龔福生等的研究顯示，62例乳腺癌患者CTCs的陽性率與TNM分期、Ki-67和HER-2表達(dá)與否顯著相關(guān)，而與月經(jīng)狀態(tài)、ER和PR表達(dá)與否無關(guān)[16]。本研究在I期患者中有1例檢出CTCs（16.7%），提示癌細(xì)胞擴(kuò)散可以出現(xiàn)在早期患者中。因此，檢測乳腺癌CTCs有助于及早確定復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的高?；颊?，通過及時(shí)治療干預(yù)，可以阻止腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。研究表明，轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者在治療前、治療中和治療后的CTCs水平均與其預(yù)后密切相關(guān)，CTCs可作為轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者獨(dú)立的預(yù)后因子。

臨床上結(jié)直腸癌的